Analisi demolitiva

MACROPOLIMERO → STRUTTURE PIÚ SEMPLICI FACILMENTE SEQUENZIABILI

Uno dei sistemi di digestione è rappresentato dagli enzimi nucleasi (endonucleasi ed esonucleasi), che sono idrolasi, sterasi, fosfatasi, fosfodiesterasi.

Le endonucleasi agiscono sulle posizioni lontane dai terminali, ma riconoscibili da questi enzimi per il carattere della sequenza. Le desossiribonucleasi agiscono sui duplex, le ribonucleasi su segmenti singoli.

Le esonucleasi agiscono su filamenti singoli, brevi, riconoscono un terminale e iniziano da esso la distruzione.

La demolizione di un desossiriboderivato è semplice, mentre la demolizione di un riboderivato avviene con la formazione di un derivato ciclico (per attacco dell’OH su P cationico).
Endonucleasi di restrizione: enzima selezionato nelle cellule batteriche (facilmente attaccate da virus, che ne promuovono lisi e distruzione), sono meccanismi di difesa (riconoscono il DNA estraneo annullando l’attacco virale).
Il DNA viene riconosciuto come duplex, il meccanismo idrolitico avviene su entrambe le eliche. Il taglio può avvenire in forma troncata o sfalsata (i terminali non sono netti, perché uno è più lungo: estremamente coesivo perché potrebbe accoppiarsi con una sequenza complementare).