Identificazione dell'enzima Nicotinamide N-metiltrasferasi quale marker molecolare del carcinoma renale a cellule chiare. Clonaggio, espressione e purificazione della proteina ricombinante.

La spiccata resistenza alla terapia antiblastica mostrata dal carcinoma renale ha reso interessante l’ipotesi di un coinvolgimento di enzimi che prendono parte alla biotrasformazione dei farmaci nei meccanismi alla base dell’oncogenesi renale. L’identificazione della nicotinamide N-metiltrasferasi è stata possibile esplorando, mediante cDNA macroarray, il profilo di espressione genica del tessuto sano e canceroso di un paziente affetto da carcinoma renale a cellule chiare (ccRCC).
L’analisi dell’espressione dell’NNMT è stata quindi estesa a 30 campioni di tessuto normale e tumorale, ottenuti da pazienti affetti da ccRCC, ed è stata condotta sia a carico dell’RNA messaggero, mediante RT-PCR semiquantitativa e Real-Time PCR, sia a carico della proteina mediante western blot e saggio per la determinazione dell’attività catalitica. Allo scopo di saggiare la specificità dell’espressione differenziale dell’NNMT nei vari istotipi cellulari di carcinoma renale, tale analisi è stata valutata in un paziente affetto da carcinoma a cellule cromofobe ed uno da oncocitoma. Succesivamente si è proceduto al clonaggio del cDNA relativo all’NNMT umana, all’espressione in un sistema procariotico e alla purificazione della proteina ricombinante.
I dati ottenuti mostrano che l’NNMT risulta significativamente più espressa nel tumore rispetto al tessuto sano in tutti i 30 casi esaminati, mentre, sia a livello del carcinoma renale a cellule cromofobe, sia dell’oncocitoma non si rileva alcun aumento della sua espressione. L’entità dell’espressione differenziale mostra una significativa correlazione inversa con le dimensioni del tumore. L’NNMT umana ricombinante è stata quindi purificata ad omogeneita.
L’elevata espressione dell’NNMT costituisce una caratteristica peculiare del ccRCC. In questo senso la valutazione dei livelli della sua espressione può rappresentare un strumento di supporto nella diagnosi differenziale dei carcinomi renali. L’identificazione di una correlazione inversa tra i livelli del trascritto per l’NNMT nel tessuto tumorale e le dimensioni della massa neoplastica suggerisce un possibile coinvolgimento di tale enzima nelle fasi precoci dell’oncogenesi renale. Successive analisi a carico della proteina ricombinante omogenea saranno volte al completamento della caratterizzazione biochimico-molecolare e alla risoluzione della struttura tridimensionale.