Il recettore dell'amaro hTAS2R46 e la modulazione del calcio intracellulare

3 Candidato: Arianna Berto Relatore: Luigia G Fresu Titolo della tesi: “Il recettore dell’amaro hTAS2R46 e la modulazione del calcio intracellulare” ABSTRACT Il recettore hTAS2R46 è un sottotipo della famiglia dei recettori dell’amaro TAS2R, espressi principalmente nella cavità oro-faringea per la percezione del gusto. hTAS2R46, così come altri sottotipi, è espresso in altre sedi anatomiche: ad esempio, a livello del polmone, nelle cellule della muscolatura bronchiale liscia (ASM) e nelle cellule epiteliali. La via del segnale comune a tutti i sottotipi TAS2R prevede l’attivazione di PLCbeta-2 che porta all’aumento del livello di calcio citosolico. Nelle ASM è stato dimostrato che hTAS2R46 attivato dal suo ligando specifico absintina causa l’uptake di calcio citosolico nel mitocondrio in seguito alla stimolazione delle cellule con istamina. Sono noti SNP (polimorfismi a singolo nucleotide) di alcuni sottotipi del recettore dell’amaro che portano alla variabilità individuale nella percezione del gusto amaro mentre non sono note le conseguenze degli SNP di hTAS2R46. In questo progetto abbiamo studiato gli effetti che questi SNP producono nella normale modulazione del calcio intracellulare. In particolare sono stati utilizzati plasmidi contenenti gli SNP d’interesse e il gene wild-type ottenuti per mutagenesi da colture batteriche di Escherichia Coli. Abbiamo quindi trasfettato cellule HeLa con tali plasmidi e abbiamo studiato le concentrazioni di calcio citosolico e mitocondriale in presenza di absintina (agonista specifico di hTAS2R46), di istamina (nota per aumentare la concentrazione di calcio) e di una loro combinazione. Cellule HeLa non trasfettate sono state usate come controllo negativo. I risultati hanno rivelato differenze nella modulazione dell’omeostasi del calcio da parte dei diversi SNP dimostrando che alcune di queste mutazioni sono a livello del sito regolatorio del recettore da parte dell’agonista e ne compromettono di conseguenza il segnale a valle.