Effetti dell'imatinib in linee cellulari di neuroblastoma umano

Il neuroblastoma 
promuove l’induzione dei fattori di crescita HASH-1 e Phox2b che, 
nell’ordine, inducono l’espressione di c-ret, la cui attivazione manda 
segnali intracellulari nel nucleo per produrre differenziazione neuronale. 
HASH-1 e Phox2b regolano anche l’espressione di tirosina idrossilasi (TH) 
e dopamina idrossilasi (DBH) che controllano la sintesi della 
noradrenalina e, più a valle, l’espressione di una famiglia di recettori per le 
tirosin chinasi (trk): 
ƒ Trk-A, recettore ad alta affinità per NGF 
ƒ Trk-B, il recettore ad alta affinità per il fattore neurotrofico 
derivante dal cervello (BDNF) 
ƒ Trk-C, il recettore ad alta affinità per il fattore neurotrofico NR-3 
Si tratta di recettori per fattori neurotrofici che promuovono il 
differenziamento, la crescita e la sopravvivenza dei neuroni sia del SNC 
che periferico.  
I marker genici espressi sono: HASH-1, un fattore di trascrizione 
tessuto specifico, coinvolto nella regolazione genica e nel differenziamento. 
Bcl2 è un proto oncogene  associato alla sopravvivenza ed individuato nel 
ganglio simpatico. N-CAM, noto anche come HNK-1 è una glicoproteina 
associata alla migrazione delle cellule dalla cresta neurale. d-HAND è un 
altro fattore di trascrizione tessuto specifico, durante lo sviluppo, la sua 
espressione è regolata verso il basso nelle cellule cromaffini, mentre 
persiste negli altri tessuti. N-myc è un membro della famiglia dei geni myc 
che codifica per b-HLD, un fattore di trascrizione che ha un’espressione 
spazio-temporale ristretta  nel SNC e periferico durante i primi stadi dello 
sviluppo. N-myc è espresso in modo uniforme nelle NCSC in migrazione; 
alti livelli di espressione di N-myc mantengono un elevato potere 
replicativo  e bloccano il differenziamento cellulare negli stadi più primitivi 
dello sviluppo. Tuttavia durante la progressione dello sviluppo embrionale, 
alti valori di myc promuovono il differenziamento neuronale (Mora et al. 
2004). 
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Il neuroblastoma 
 
Figura 1: Sciluppo del SNS e geni del neuroblastoma 
 
 
1.2 CLASSIFICAZIONE DEI NEUROBLASTOMI 
 
Una volta i tumori neuroblastici erano definiti “enigmatici” per le loro 
inaspettate caratteristiche cliniche come involuzione, regressione 
spontanea, maturazione e progressione aggressiva. Oggi invece, sulla base 
di nuove ricerche, questi tumori sono definiti eterogenei con proprietà 
biologiche individuali strettamente correlate alle loro caratteristiche 
cliniche ed istologiche uniche (Shimada et al. 1999). 
L’International Neuroblastoma Patology Classification si basa, con 
qualche modifica, sulla classificazione di Shimada basata sull’età in cui il 
tumore è diagnosticato e che divide i tumori neuroblastici a seconda 
dell’abbondanza relativa di stroma e all’avanzamento del differenziamento. 
Sulla base di ciò possiamo individuare quattro diverse categorie di tumori: 
ƒ Neuroblastomi poveri in stroma con neuroblasti indifferenziati, in 
fase di differenziamenti o differenziati 
ƒ Ganglioneuroblastomi ricchi in stroma e con neuroblasti sia 
differenziati che non. 
ƒ Ganglioneuromi stroma dominanti con neuroblasti in maturazione 
e cellule gangliari mature 
ƒ Ganglioneuroblastoma nodulare  composto sia da cellule ricche in 
stroma, sia povere, sia stroma dominanti e con neuroblasti a 
differenziazione variabile. 
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Il neuroblastoma 
Questa classificazione introduce un indice di mitosi (MKI) come indice 
per la prognosi. Possiamo quindi riassumere in un’unica tabella i vari tipi 
di tumori neuroblastici, la loro età di scoperta, le loro caratteristiche 
istologiche e la conseguente prognosi favorevole o sfavorevole(Shimada et 
al.1999). 
 
Classificazione 
internazionale del 
neuroblastoma 
Età  
(in anni) 
Istologia 
Prognosi 
Neuroblastoma ( 
povero in stroma)  
< 1,5 
Poco differenziato 
o differenziato e 
MKI basso o 
intermedio 
Favorevole 
 1,5 - 5 
Differenziato con 
MKI basso  
Favorevole 
< 1,5 
Tumore 
indifferenziato MKI 
basso 
Sfavorevole 
 1,5 - 5 
Tumore 
indifferenziato o 
poco differenziato, 
qualunque MKI 
Sfavorevole 
 > 5 Tutti i tumori Sfavorevole 
Ganglioneuroblastoma 
intermedio (ricco in 
stroma) 
A tutte le età Tutti i tumori Favorevole 
Ganglioneuroma in 
maturazione e maturo    
(stroma dominante) 
A tutte le età Tutti i tumori Favorevole  
Ganglioneuroblastoma 
nodulare ( sia stroma 
ricco, sia povero che  
dominante) 
A tutte le età Tutti i tumori Sfavorevole 
 
Ogni tumore neuroblastico può poi presentarsi in vari stadi:  
ƒ Stadio 1 → tumore localizzato, asportazione completa, possibile 
presenza di residui microscopici. 
ƒ Stadio 2A → tumore localizzato, asportazione incompleta, nodi 
ipsilaterali negativi. 
ƒ Stadio 2B → tumore localizzato, asportazione completa, presenza 
di nodi ipsilaterali, assenza di nodi controlaterali. 
ƒ Stadio 3 → resezione incompleta, il tumore ipsilaterale si estende 
oltre la linea mediana. 
ƒ Stadio 4 → ogni tumore primario che coinvolge altri organi. 
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Il neuroblastoma 
ƒ Stadio 4s → localizzazione del tumore limitata a pelle, fegato e 
midollo osseo ( limitata a bambini di età inferiore ad 1 anno) 
(Weinsteinet al. 2003). 
In base a ciò possono essere ancora individuate diverse categorie di 
rischio:  
ƒ Tumori ad alto rischio → include una malattia disseminata con 
molte alterazioni geniche compresa l’ amplificazione di N-myc 
(corrisponde agli stadi 3 e 4). 
ƒ Tumori a rischio intermedio → si tratta di tumori molto estesi con 
molte alterazioni geniche, compresa l’ amplificazione di N-myc. 
ƒ Tumori a basso rischio → comprendono bambini con piccoli 
tumori che possono essere trattati semplicemente con la chirurgia ( 
corrispondono agli stadi 1 e 2 A) (Van Noesel et al. 2003). 
I tumori in fase 4s costituiscono una varietà di cancro caratteristica  
per il fenomeno della regressione spontanea. Questo fenomeno, si ha 
quando una neoplasia istologicamente documentata subisce una 
regressione, parziale o totale, senza nessun tipo di terapia medica 
specifica. Il meccanismo responsabile della regressione spontanea è 
l’apoptosi (Tortajada et al. 2005). 
 
1.3 INCIDENZA E FATTORI PREDISPONENTI 
 
I neuroblastomi rappresentano 8-10% di tutti i tumori pediatrici e 
l’80% di quelli dei bambini al di sotto dei 5 anni, costituendo il più rilevante 
tumore solido in questa fascia di età (Van Noesel et al. 2003). I maschi sono 
colpiti più frequentemente rispetto alle femmine con un rapporto 1,2:1  ed i 
più colpiti sono i bambini di razza bianca (Schüz et al. 1999). 
Per ragioni ancora sconosciute la prognosi nei bambini al di sotto di 
1 anno di età al momento della diagnosi, è significativamente migliore 
rispetto a quella di bambini più grandi allo stesso stadio clinico, dove è più 
probabile la trasformazione in ganglioneuroblastoma (Van Noesel et al. 
2003). 
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Il neuroblastoma 
L’1-2% dei pazienti presenta nella sua storia famigliare precedenti 
casi di questo tumore, che possiede un carattere mendeliano autosomico 
dominante con penetranza incompleta. 
L’irradiazione fetale è correlata con un maggior rischio di sviluppare 
un neuroblastoma, così come l’esposizione occupazionale dei genitori a 
radiazioni, idrocarburi volatili, pesticidi-insetticidi, metalli e diossina. In 
particolare una esposizione del padre prima del concepimento, può 
indurre occasionali mutazioni germinali; queste sostanze sono anche in 
grado di passare la barriera placentare. 
L’assunzione terapeutica di ormoni sessuali durante la gestazione è 
associata ad un maggior rischio di contrarre il neuroblastoma, allo stesso 
modo di altri farmaci come diuretici, miorilassanti, ansiolitici, analgesici 
ecc. 
Anche il consumo di tabacco ed alcool durante la gravidanza è 
associto ad un maggiore rischi di neuroblastoma nei bambini. L’uso 
frequente di tinte per capelli da parte della madre, è collegato ad un 
aumento addirittura tre volte maggiore del previsto nei bambini esposti 
intrauterinamente. 
La relazione tra parto prematuro e rischio di neuroblastoma è molto 
controversa, mentre è stato dimostrato che un alla nascita, un peso 
inferiore ai 2,5 Kg incrementa significativamente il rischio di questa 
patologia negli stadi più avanzati. 
 
1.4 ALTERAZIONI GENICHE 
 
L’aneuploidia (l’aumento o la perdita di uno o più cromosomi da 
parte di un corredo diploide) è una forma di instabilità genetica 
frequentemente osservata nei neuroblastomi. Tumori diploidi e triploidi 
sono spesso riscontrati in pazienti al di sopra di un anno di età associati ad 
anormalità strutturali che coinvolgono perdita di alleli sul braccio corto del 
cromosoma 1, amplificazione del gene MYCN con sviluppo di tumori 
aggressivi. Tumori triploidi o iperploidi sono spesso riscontrati in pazienti 
al di sotto dei 12 mesi o in tumori a basso rischio, con poche o nessuna 
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Il neuroblastoma 
anormalità nella struttura cromosomica. Tumori pentaploidi  sono rari e 
riscontrati in pazienti con prognosi favorevole. 
Si pensa che questa non corretta segregazione dei cromosomi, sia il 
risultato di un amplificazione o ipertrofia dei centrosomi (Van Noesel et al 
2003). 
 
1.4.1 DELEZIONE DEL CROMOSOMA 1
Delezini del braccio corto del cromosoma 1 sono state riscontrate 
nel 30-80% dei cariotipi di cellule di neuroblastoma, mentre nel 30% è stata 
riscontrata la perdita in eterozigosi. La presenza di differenti livelli di 
delezione nel neuroblastoma, dimostrati da differenti aspetti clinici, 
suggerisce la presenza di differenti geni soppressori  associati allo sviluppo 
di neuroblastomi localizzati sul cromosoma 1 (Hiyama et al. 2001). 
Possiamo avere due tipi di delezione: una interstiziale, dove la 
regione sovraespressa (SRO) è collocata a livello 1p36.1-1p36.2, l’altra 
terminale, dove SRO è posta a livello 1p36.3 e1p32 (Maris et al. 2001). 
Questi tre loci sono ritenuti quindi essere portatori di geni soppressori per 
il neuroblastoma; a livello 1p36.3, per esempio, è stato identificato il gene 
p73, omologo di p53, la fosfoproteina che è il “check point”  nel ciclo 
cellulare che monitora i danni al DNA. 
Possiamo infine dire che, loci che subiscono delezione terminale portano 
ad una prognosi peggiore rispetto a quelli con delezione interstiziale e, più 
estesa è la delezione terminale, più alto sarà il potenziale di malignità del 
tumore (Hyiama et al. 2001). 
 
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