Descrizione fenotipica di linee cellulari di medulloblastoma geneticamente modificate

Nel nostro modello sperimentale è stata utilizzata la linea UW228-1, isolata da un MB umano della fossa posteriore e del verme cerebellare in una paziente dell’età di 9 anni. Il tumore da cui è stata derivata questa linea cellulare era composto da cellule piccole, densamente stipate, uniformi con nuclei ipercromici da ovali a rotondi, circondate da scarso citoplasma, corrispondente al quadro istologico compatibile alla variante classica di MB. In coltura le cellule di questa linea crescono aderenti in monostrato, con tempi di duplicazione che vanno dalle 26 alle 43 ore. Raramente sono state trovate formazioni riconoscibili come pseudorosette. Si tratta di cellule aneuploidi con 57-59 cromosomi. Questa linea presenta una copia extra dei cromosomi 1, 9, 15, 19, 21, due copie addizionali del cromosoma 20, trisomia del cromosoma 7 e quattro marker cromosomici sconosciuti (Tab. 2) Inoltre attraverso tecniche di citogenetica e di biologia molecolare si è riscontrata la presenza di LOH (loss of heterozygosity) a livello di sequenze del cromosoma 17p distali al locus del gene oncosoppressore p53. Questa linea ha mostrato positività per sinaptofisina, vimentina, NSE (neuron specific enolase) e NFP (proteine dei neurofilamenti). Il terreno utilizzato per le cellule in coltura è stato DMEM F12 contente 1% di L-glutammina 2mM (Euroclone; Milano, IT), FBS al 10% (Foetal Bovine Serum, Euroclone, Life Sciences Division, Milano, IT) inattivato al calore, cocktail di penicillina/streptomicina all’1% (Euroclone; Milano, IT), 1% amminoacidi non essenziali (Eagle’s non essential amino acid; Euroclone, Milano, IT). La linea cellulare è stata scelta perché ha mostrato un idonea efficienza di trasfezione e sensibilità all’agente selettivo G418.