Variabilité spécifique et intraspécifique des activités enzymatiques produites par les hyphomycètes aquatiques

Un modèle de microcosme élaboré par Suberkropp (1991) a été utilisé.
Une pompe, reliée à un débitmètre injectant de l’air à un débit de 80 à 100 mL par minute, assure le bullage, quatre orifices permettant l’aération. L’ensemble des manipulations est réalisé en conditions stériles.

Huit rondelles de feuilles étaient disposées sur chaque boîte de culture de Tetrachaetum elegans, Articulospora tetracladia et de Flagellospora curvula, afin qu’elles soient colonisées par le champignon pendant 7 jours. Avant de poser les rondelles de feuilles sur le mycélium, elles étaient réhydratées par incubation dans l’eau déminéralisée pendant une nuit, à la température ambiante.
Puis ces disques étaient transférés dans des microcosmes stériles contenant 15 ml de milieu sporulation contenant 10 mg KNO3, 0.55 mg K2PO4, 0,5 g MOPS, 0.1 g CaCl2 2H2O, 10 mg MgSO4 7 H2O, 1 L d’eau distillée ajustée à pH 7.0 avec une solution de potasse à 1 M (Suberkropp 1991). Ceci permet de se replacer dans des conditions proches de la rivière où les spores colonisent du matériel déjà imbibé et en partie lessivé. Les microcosmes ont été incubés à une température de 15 °C durant 4 jours.

Le milieu de sporulation a été filtré sur papier (n° 50, Whatman International Ltd, England) et du thimerosal (Sigma) a été ajouté (0,01% final) pour l’inhibition du développement microbien. Après la filtration, les rondelles de feuilles étaient conservées à -18 °C, jusqu'au dosage d’ergostérol. Le filtrat par microcosme est disponible pour tester l’activité enzymatique d’hyphomycètes. Deux colonisations sur le même mycélium ont été faites pour pouvoir comparer statistiquement les résultats.