Studio dell'espressione dei trasportatori kcc2 e nkcc1 durante lo sviluppo nel talamo murino

Nel sistema nervoso centrale dell'adulto il neurotrasmettitore GABA media la trasmissione inibitoria, mentre durante lo sviluppo postnatale assume un ruolo eccitatorio e morfogenico (Ben-Ari, 2002). Questa modificazione funzionale è dovuta al progressivo switch nell'espressione di due cotrasportatori: NKCC1 e KCC2 che modificano la concentrazione intracellulare dello ione cloruro. Il primo viene espresso soprattutto nelle prime fasi dello sviluppo neuronale e determina un accumulo di Cl^- all'interno della cellula; il secondo viene invece espresso maggiormente nelle fasi più tardive dello sviluppo e determina una fuoriuscita di Cl^- dalla cellula. L'alterata espressione di questi due cotrasportatori può modificare il sottile equilibrio tra eccitabilità e inibizione causando l'insorgenza di patologie caratterizzate da ipereccitabilità come epilessia e schizofrenia (Chamma et al., 2012). Alla luce di queste considerazioni lo scopo di questo studio è stato quello di analizzare la distribuzione spazio-temporale dei cotrasportatori KCC2 e NKCC1 nel talamo murino durante diverse fasi di sviluppo postnatale comprese tra P0 e P40. A tal fine sono state applicate metodologie di biochimica, immunocitochimica e di immunofluorescenza allo scopo di:

• confrontare l'espressione dei due cotrasportatori nei nuclei talamici murini in diverse fasi dello sviluppo postnatale (P0, P5, P7, P14, P22) tramite tecnica di Western-blot

• caratterizzare la distribuzione topografica di KCC2 e NKCC1 nelle diverse zone talamiche tramite reazioni di immunocitochimica

• ottenere dati sulla distribuzione intracellulare mediante l'analisi ultrastrutturale della marcatura ottenuta con anticorpo anti-KCC2 e anti-NKCC1

• ottenere dati qualitativi relativi alla espressione ed eventuale colocalizzazione di KCC2 e di NKCC1 con noti marcatori morfologici GABAergici e glutammatergici tramite reazioni di immunofluorescenza e successiva analisi al microscopio confocale