Riduzione selettiva dell’isoforma p66 della proteina Shc mediante siRNA in sistemi cellulari in coltura

5 1.1. MODULAZIONE DELL’ESPRESSIONE DELLE PROTEINE NELLA RICERCA BIOMEDICA Il fenotipo e le specifiche funzioni delle diverse cellule (epatociti, neuroni, etc.) sono strettamente legate al loro corredo proteico (proteoma). Una proteina è codificata da uno specifico gene presente nel genoma cellulare, il quale viene trascritto in un RNA messaggero e questo, successivamente, tradotto dal complesso ribosomiale citoplasmatico in una proteina funzionale, destinata a rimanere in cellula oppure ad essere secreta. L’espressione dei geni che codificano per le proteine è regolata con meccanismi epigenetici (ad esempio la metilazione) che permettono alle cellule appartenenti allo stesso organismo, che possiedono quindi lo stesso genoma, un’espressione differenziale di questi geni, nei diversi tessuti e nei diversi tipi cellulari. Per indagare la funzione di una proteina è utile modulare la sua espressione all’interno della cellula e studiare gli effetti biologici che ne derivano. La modulazione dell’espressione può consistere nell’iperespressione della proteina in studio che, essendo maggiormente presente nella cellula, causerà un’esaltazione dell’effetto legato alla sua funzione, oppure nell’ipoespressione della proteina che, al contrario, causerà il silenziamento del suo effetto biologico. Le metodiche per la modulazione dell’espressione delle proteine si basano sull’introduzione all’interno della cellula, mediante il processo noto come trasfezione, di acidi nucleici specifici per la proteina di interesse. L’acido nucleico potrebbe essere il cDNA del gene della proteina, il quale viene tradotto insieme al gene “endogeno” determinando l’iperespressione di quella determinata proteina; oppure potrebbe trattarsi di oligonucleotidi “antisense” o di siRNA specifici per l’mRNA della proteina, che provocano il silenziamento dell’espressione. Queste metodiche, che possono realizzare una modulazione temporanea o stabile dell’espressione della proteina all’interno cellula, permettono lo studio degli effetti biologici legati alla proteina studiata. Durante il mio tirocinio ho approfondito le metodiche di ipoespressione delle diverse isoforme della proteina Shc, utilizzando siRNA specifici.