Studio sulla proteina MsmDnaB1: una nuova inteina di classe 3
L’elaborato di tesi ha come oggetto la caratterizzazione strutturale di una nuova proteina recentemente scoperta appartenente alla famiglia proteica delle Inteine. Le inteine sono delle proteine in grado di mediare reazione di splicing, un processo post-traduzionale che consiste nella ricombinazione di due frammenti proteici chiamati esteine e l’esclusione della proteina in esame appunto l’inteina; si dividono i tre classi in base alle differenze nel meccanismo di splicing. In campo biotecnologico le inteine sono utilizzate per la purificazione di proteine ricombinanti utilizzando le inteine come tag e per le reazioni di IPL (Intein-Mediated Protein Ligation) cioè reazione tra peptidi sintetici e non con proteine sfruttando la capacità di mediare splicing delle stesse inteine, come anche nel caso precedente. L’ inteina che ho studiato è stata denominata MsmDnaB1 ed è stata attribuita alla classe 3, una classe di cui il tipo di meccanismo di spilcing non è stato ancora definito. Nel mio lavoro di tesi abbiamo cercato di definire la struttura secondaria di MsmDnaB1 mediante l’introduzione di mutazioni nella sequenza genica e utilizzando tecniche spettroscopiche, abbiamo valutato sia la compromissione della stessa struttura dopo reazione di splicing ,effettuando anche studi comparativi con inteine di classe diverse già caratterizzate, e sia le modificazioni (rallentamenti) nella cinetica di splicing, infine abbiamo individuato uno step importante che caratterizza la reazione di splicing delle inteine di classe terza mediante metodiche di digestione enzimatica e analisi LC-MS.
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Informazioni tesi
Autore: | Vincenzo Pilato |
Tipo: | Laurea II ciclo (magistrale o specialistica) |
Anno: | 2010-11 |
Università: | Università degli Studi di Napoli - Federico II |
Facoltà: | Scienze Biotecnologiche |
Corso: | Biotecnologie mediche, veterinarie e farmaceutiche |
Relatore: | Alessandra Romanelli |
Lingua: | Italiano |
Num. pagine: | 77 |
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