Ruolo del gene accessorio Vpr-Like nella virulenza e nella replicazione del virus dell’ Artrite Encefalite Caprina

L’attività basale dei promotori LTR di CAEV, MVV e HIV è stata paragonata al promotore del CMV.
Per questo sono stati costruiti quattro plasmidi, tutti contenenti il gene reporter GFP guidato da:

1) promotore virale del CMV (pCMV);
2) il promotore della sequenza LTR del virus MVV KV-1772 (pLTR KV-1772);
3) il promotore della sequenza LTR dell’isolato CAEV CO (pLTR CO);
4) il promotore della sequenza del LTR del virus dell’HIV-1 (pLTR HIV).

Questi quattro plasmidi sono stati utilizzati per transfettare le cellule HeLa. Quarantotto ore dopo la transfezione un campione di queste cellule è stato analizzato per misurare la fluorescenza della proteina GFP utilizzando l’analisi FACS. I risultati di questa analisi hanno mostrato che l’attività basale dei promotori LTR di CAEV e MVV era marcatamente più alta del promotore LTR di HIV-1, senza però significative differenze dall’attività basale del promotore di CMV.
Successivamente sono stati costruiti tre plasmidi, pTat KV-1772, pTat CAEV CO, pTat HIV, contenenti la sequenza codificante la proteina Tat, per quantificare l’attività di trans-attivazione della proteina Tat CAEV e MVV verso la sequenza del promotore LTR corrispondente rispetto al sistema Tat/LTR del HIV-1.

Questi costrutti contenevano il gene della proteina Tat regolata dal promotore di CMV. Le cellule HeLa sono state cotransfettate con pLTR HIV, pLTR KV-1772, pLTR CO che esprimevano il gene GFP sotto la guida del promotore LTR e il rispettivo plasmide esprimente la sequenza codificante la proteina Tat. Anche in questo caso la fluorescenza è stata quantificata tramite l’analisi FACS a 48 ore dalla transfezione.