Ruolo dei miRNA contenuti nelle vescicole extracellulari rilasciate dalle cellule leucemiche nella modulazione della risposta antitumorale nel modello murino di leucemia linfatica cronica Eμ-TCL1
Isolamento delle EVs da leucociti
Per l'isolamento delle EVs leucemiche, i leucociti splenici dei topi Eμ-TCL1 ed Eμ-TCL1/p66ShcKO sono stati incubati per 24h a 37°C (5% di CO2) in terreno RPMI senza siero. Il mezzo di coltura è stato poi prelevato e centrifugato a 2'000 rpm (raggio di 120 mm) per 10' a temperatura ambiente per escludere le cellule dal terreno condizionato. Il sovranatante ottenuto è stato congelato a -80°C oppure utilizzato subito per i passaggi successivi.
Nel caso di campione congelato, dopo scongelamento è stata ripetuta la centrifuga a 2'000 rpm di 10', mentre in caso di campione fresco questo è stato subito centrifugato a 10'000 rpm (centrifuga J2-21, rotore JA-20) per 30' a 4°C in tubi Nalgene Centrifuge Ware (Thermo Fisher #31170500) per escludere i detriti cellulari. Il sovranatante è stato poi centrifugato a 30'000 rpm (ultracentrifuga XL-70, rotore Sw-40Ti) per 1h 30' a 4°C in tubi Ultraclear™ (Beckman Coulter #344059).
Il pellet ottenuto, rappresentato dalle EVs rilasciate, è stato portato a secco tenendo i tubi capovolti su carta assorbente per circa 15', ed è stato poi risospeso in 100 μl di PBS e quantificato con il sistema QIAxpert (Qiagen) (λ=280 nm). Per i successivi trattamenti delle cellule T WT i campioni di EVs sono stati conservati a -80°C fino al loro utilizzo.
Questo brano è tratto dalla tesi:
Ruolo dei miRNA contenuti nelle vescicole extracellulari rilasciate dalle cellule leucemiche nella modulazione della risposta antitumorale nel modello murino di leucemia linfatica cronica Eμ-TCL1
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Informazioni tesi
| Autore: | Gianpiero Lupoli |
| Tipo: | Laurea II ciclo (magistrale o specialistica) |
| Anno: | 2022-23 |
| Università: | Università degli Studi di Siena |
| Facoltà: | Scienze Biologiche |
| Corso: | Biologia Molecolare e Cellulare |
| Relatore: | Cristina Ulivieri |
| Lingua: | Italiano |
| Num. pagine: | 49 |
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