Validazione del test rapido di sterilità su prodotti per terapia cellulare all'interno di una cell factory ospedaliera

Questa tesi si è proposta di effettuare la convalida del test rapido di sterilità sui prodotti per terapia cellulare, ponendo particolare attenzione all’esecuzione della Performance Qualification (PQ) dello strumento BactAlert 3D ® Biomérieux, impiegato per la rilevazione di contaminazione microbica (batteri e miceti) all’interno di prodotti di terapia cellulare ed emocomponenti. I prodotti per terapia cellulare rappresentano una nuova classe di farmaci biologici e, in virtù delle loro peculiarità, le leggi vigenti in materia di sperimentazione ed impiego clinico impongono che la loro produzione sia effettuata in appositi locali a contaminazione controllata, denominati Clean Rooms, all’interno di strutture denominate “Cell Factory” per prevenire e controllare la contaminazione microbica. Uno dei requisiti fondamentale per il rilascio finale del farmaco è rappresentato dal certificato di sterilità del prodotto che viene eseguito, nel caso del Laboratorio di Terapie Cellulari dell’Ospedale Meyer di Firenze, mediante lo strumento BactAlert 3D®. In accordo con le normative vigenti, lo strumento in questione deve essere sottoposto ad una fase di convalida denominata Performance Qualification al fine di poterlo impiegare per l’analisi di sterilità sui prodotti per terapia cellulare. Lo scopo principale di questa tesi è stato pertanto quello di saggiare i 3 punti fondamentali di una Performance Qualification (riproducibilità, stabilità ed efficienza) applicati allo strumento BactAlert 3D ®. La Performance Qualification è stata condotta, seguendo i criteri contenuti nella Farmacopea Europea, effettuando un primo test di fertilità seguito dal test di sensibilità, specificità e riproducibilità dello strumento. Sono state utilizzate concentrazioni note pari a 1 UFC/ml e 50 UFC/ml di 9 ceppi microbici e fungini, inoculate all’interno di 6 diversi flaconi dello strumento BactAlert 3D per saggiare la capacità dello strumento di rilevare la crescita microbica (test di fertilità), la capacità di rilevare una concentrazione microbica minima (1 UFC) e massima (50 UFC) (test di sensibilità) e la sua riproducibilità, valutata effettuando 3 ripetizioni dei due test precedenti. Le concentrazioni note dei ceppi microbici sono state ottenute mediante diluizioni scalari a partire da ceppi liofilizzati, oppure utilizzando il metodo Bioball ® Multishot 550. Per saggiare infine la specificità dello strumento, ovvero la capacità di rilevare la contaminazione microbica nei soli flaconi risultati positivi, tali falconi sono stati seminati su piastra e le colonie cresciute sono state identificate con il sistema automatico Vitek ®. Per il genere Aspergillus Niger è stata effettuata anche un’identificazione al microscopio ottico.
Dai risultati ottenuti si può affermare che la Performance Qualification dello strumento è significativamente riuscita: sono stati infatti ottenuti dei risultati riproducibili e stabili e lo strumento si è dimostrato sensibile e specifico nel rilevare le varie concentrazioni microbiche inoculate nei flaconi. Il dato più significativo è stato quello relativo al tempo di incubazione necessario per la rilevazione di positività (24 ore in media) poiché questo permetterà di disporre di un strumento convalidato e rapido nel rilevare la contaminazione microbica di prodotti peraltro destinati, nella maggioranza dei casi, a pazienti con un sistema immunitario compromesso. Il buon esito della convalida dello strumento, pone inoltre le basi per un ampliamento della fase di convalida dell’intero test di sterilità, che potrà essere eseguita saggiando l’interferenza del terreno di coltura delle cellule mesenchimali e della soluzione crioconservante con la rilevazione della crescita microbica.